สารพันธุกรรม ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรสแบบเรียลไทม์

สารพันธุกรรม ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมามีการปรับเปลี่ยน การตรวจหา สารพันธุกรรม เช่น การตรวจหาสารพันธุกรรมแบบเรียลไทม์ RT-การตรวจหาสารพันธุกรรม นำหน้าด้วยตัวแปรที่มีการตรวจจับการเรืองแสงของผลิตภัณฑ์ การตรวจหาสารพันธุกรรมที่จุดสิ้นสุด มีการเพิ่มโพรบฟลูออเรสเซนต์เฉพาะลงในส่วนผสมของปฏิกิริยา จากนั้นกำหนดระดับการเรืองแสงหลังจากผ่านไป 30 ถึง 40 รอบ โพรบเรืองแสงเฉพาะหรือสีย้อมแบบอินเทอร์คาเลตติ้

ซึ่งยังถูกเติมลงในส่วนผสมของปฏิกิริยา ในการตรวจหาสารพันธุกรรมแบบเรียลไทม์ด้วย แต่ในกรณีนี้แอมพลิฟายเออร์ทำให้สามารถตรวจจับการเรืองแสงในแต่ละรอบ และสังเกตการณ์เพิ่มปริมาณของผลิตภัณฑ์ การตรวจหาสารพันธุกรรม ในแต่ละรอบหลอดทดลอง จากนั้นใช้การสอบเทียบที่มีอยู่กำหนดปริมาณเริ่มต้น ที่แน่นอนของตัวอย่างในตัวอย่าง ความคืบหน้าในด้านนี้ทำให้สามารถใช้โพรบอิสระหลายตัวในปฏิกิริยา การตรวจจับผลิตภัณฑ์

การตรวจหาสารพันธุกรรมหลายตัวพร้อมกัน และการสร้างระบบมัลติเพล็กซ์ การตรวจหาสารพันธุกรรม วิธีการตรวจหาสารพันธุกรรม ทางเลือกสำหรับการขยายกรดนิวคลีอิก ปฏิกิริยาลูกโซ่ LCR หลักการนี้คล้ายกับหลักการของการตรวจหาสารพันธุกรรม แต่แทนที่จะใช้สารพันธุกรรมพอลิเมอเรสและ dNTP จะใช้ลิกาเซที่ทนความร้อนและโอลิโกนิวคลีโอไทด์จำเพาะ 4 ตัว ซึ่งเติมลงในส่วนผสมของปฏิกิริยามากเกินไป โอลิโกนิวคลีโอไทด์ 2 อันแต่ละอัน

ซึ่งเป็นส่วนเสริมของชิ้นส่วนจำเพาะ ของสายแม่แบบสารพันธุกรรมที่จะตรวจพบและอยู่ติดกันโดยตรง ในเวลาเดียวกันพวกมันประกอบกับโอลิโกนิวคลีโอไทด์คู่ที่สอง หลังจากแม่แบบสารพันธุกรรมเสื่อมสภาพที่ 95 องศาเซลเซียส โอลิโกนิวคลีโอไทด์ถูกผูกมัดโดยชิ้นส่วนจำเพาะของสาย สารพันธุกรรมแม่แบบและผูกมัดที่ 50 องศาเซลเซียส นอกจากนี้สองขั้นตอนนี้ของวัฏจักรถูกทำซ้ำหลายครั้ง ส่งผลให้เกิดการเพิ่มขึ้นแบบทวีคูณในโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่พันธะโควาเลนต์

สำหรับการตรวจจับเชิงปริมาณอย่างรวดเร็ว โอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่ผูกมัดจะใช้ 2 ฉลาก ไบโอตินที่ปลายด้านหนึ่ง โอลิโกนิวคลีโอไทด์ ดังนั้น พวกมันจึงถูกจับโดยแอนติบอดีต้านฟลูออเรสซีน บนผิวเมมเบรนหรือไมโครเพลท แอนติบอดี ยาปฏิชีวนะที่ผสานกับอัลคาไลน์ฟอสฟาเตสยังมีปฏิสัมพันธ์เชิงปริมาณ กับคอมเพล็กซ์คงที่ที่เกิดขึ้นและหลังจากเพิ่มสารตั้งต้นแล้วจะให้ผลิตภัณฑ์ที่มีสี ระบบขยายสัญญาณแบบเร่งปฏิกิริยาหรือเทคโนโลยีโพรบไซคลิเป็นสิ่งที่ตรงกันข้าม

เนื่องจากหลักการไม่ได้เชื่อมโยงโพรบโอลิโกนิวคลีโอไทด์สองตัว แต่ในทางกลับกันให้ตัดส่วนแทรกไรโบนิวคลีโอไทด์เสริมโดยใช้เอนไซม์ RNase H และรับจากโพรบสารพันธุกรรม RNA-DNA แบบยาวหนึ่งอันของสารพันธุกรรมโอลิโกนิวคลีโอไทด์สั้นสองอัน จากนั้นจะตรวจพบโดยโพรบดีออกซีนิวคลีโอไทด์สากลหนึ่งอัน ที่คอนจูเกตด้วยเอนไซม์มาร์กเกอร์ ข้อดีของวิธีการนี้คือลักษณะอุณหภูมิความร้อนคงที่ของปฏิกิริยา การยกเว้นความเป็นไปได้ของการปนเปื้อนข้าม

ความเร็วในการดำเนินการน้อยกว่า 1 ชั่วโมง และระบบอัตโนมัติเต็มรูปแบบ ข้อดีของ RCR เหนือวิธีการอื่นๆในการตรวจจับกรดนิวคลีอิกเป้าหมาย โดยใช้ไฮบริไดเซชันในแหล่งกำเนิด โดยใช้โพรบที่มีฉลากกัมมันตภาพรังสี จำเป็นต้องมีเป้าหมายในการเตรียมที่วิเคราะห์ในปริมาณหลายพันชุด บ่อยครั้งที่จำนวนของลำดับที่ผิดปกติในการเตรียมมีนัยสำคัญในการวินิจฉัย แต่น้อยกว่าจำนวนสำเนาที่ต้องการของเป้าหมาย และการผสมข้ามพันธุ์สามารถให้ผลลัพธ์เชิงลบที่เป็นเท็จ

เพื่อระบุลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ไม่ซ้ำกัน โดยการตรวจหาสารพันธุกรรม สำเนาแม่แบบ 10 ชุดก็เพียงพอแล้ว ข้อดีของปฏิกิริยาโพลีเมอเรสมีดังนี้ วิธีการนี้เป็นไปโดยตรงและช่วยให้คุณบรรลุความไวสูงสุดที่เป็นไปได้ จากสำเนาหลายชุดไปจนถึงเชื้อก่อโรคในตัวอย่าง ความจำเพาะของวิธีการเข้าใกล้ 100 เปอร์เซ็นต์ วัสดุใดๆ ก็ตามที่เหมาะสำหรับการวิเคราะห์ การตรวจหาสารพันธุกรรม รวมถึงการเตรียมการตรวจเนื้อเยื่อ วิธีการนี้ทำให้สามารถกำหนดจำนวนสำเนาของเชื้อโรค

สังเกตการเปลี่ยนแปลงดังกล่าว วัสดุทดสอบสามารถฆ่าเชื้อด้วยสารเคมี หรือการบำบัดด้วยความร้อน เวลาที่รวบรวม และด้วยเหตุนี้ ดังนั้นจึงไม่รวมถึงความเป็นไปได้ของการติดเชื้อของบุคลากรระหว่าง การตรวจหาสารพันธุกรรม วิธีการนั้นง่ายในการดำเนินการ ระบบอัตโนมัติเต็มรูปแบบเป็นไปได้. ผลลัพธ์จะได้รับหลังจากไม่กี่ชั่วโมง กล่าวคือ ภายในหนึ่งวันทำการ พื้นที่ใช้งาน วิธี การตรวจหาสารพันธุกรรมใช้ในการตรวจหาไวรัส มัยโคแบคทีเรีย โปรโตซัว

แบคทีเรียในตัวอย่างทางคลินิก เพื่อตรวจหาความผิดปกติทางพันธุกรรมที่มีมาแต่กำเนิดและที่ได้มา รวมทั้งเพื่อระบุตัวบุคคลขอบเขตของการตรวจหา สารพันธุกรรมในการวินิจฉัยจะค่อยๆขยายออกไป เนื่องจากในทางปฏิบัติทางคลินิก การตรวจชิ้นเนื้อขนาดเล็กมากที่ได้รับนั้นเกี่ยวข้องกับการปฏิบัติทางคลินิกมากขึ้น เช่น ในระหว่างการศึกษาด้วยการส่องกล้อง หรือเป็นเครื่องช่วยหายใจแบบเข็ม ในกรณีเช่นนี้การวิเคราะห์ทางเนื้อเยื่อวิทยาแบบธรรมดาจะทำได้ยาก

การตรวจหาสารพันธุกรรมที่สามารถให้บริการได้ ในการศึกษาภูมิคุ้มกันมักใช้การตรวจหาสารพันธุกรรม เพื่อกำหนดความแตกต่างของยีนที่มีผลิตภัณฑ์โปรตีน ที่เกี่ยวข้องกับปฏิกิริยาภูมิคุ้มกัน เพื่อกำหนดการแสดงออกของไซโตไคน์ ไซโตไคน์ รีเซพเตอร์และโมเลกุลเอฟเฟกเตอร์อื่นๆ สำหรับการพิมพ์สารพันธุกรรมของอัลลีล HLA เป็นต้น ดีเอ็นเอที่แยกได้จากลิมโฟไซต์ถูกวิเคราะห์โดยแวเรียนต์ การตรวจหาสารพันธุกรรมต่อไปนี้ การตรวจหาสารพันธุกรรมไพรเมอร์

ซึ่งมีลำดับเฉพาะ PCRSSP การตรวจหาสารพันธุกรรมโพรบโอลิโกนิวคลีโอไทด์ที่มีลำดับเฉพาะ การตรวจหาสารพันธุกรรม-SSOP การวิเคราะห์ข้อจำกัด การตรวจหาสารพันธุกรรมของผลิตภัณฑ์การขยายสัญญาณ PCRRFLP วิธีการตรวจหาสารพันธุกรรมของการทำไฮบริไดเซชัน แบบย้อนกลับของชิ้นส่วนที่ขยายด้วยโพรบโอลิโกนิวคลีโอไทด์ จับจ้องอยู่ที่เมมเบรนหรือส่วนรองรับอื่นๆที่เป็นของแข็ง การศึกษาการแสดงออกของยีนโดยวิธีไมโครชิป

ไมโครชิปชีวภาพเป็นหนึ่งในเครื่องมือใหม่ล่าสุด ในด้านชีววิทยาและการแพทย์ซึ่งผลิตในปี 1975 กลายเป็นต้นแบบของไมโครชิปสมัยใหม่ เขาใช้กรดนิวคลีอิกที่ติดฉลากเพื่อกำหนดลำดับเฉพาะ ท่ามกลางชิ้นส่วน สารพันธุกรรมที่ยึดไว้กับฐานรองรับที่มั่นคงอย่างแม่นยำที่สุด ไบโอชิปถูกอธิบายโดยชื่อภาษาอังกฤษว่า DNA ไมโครอาร์เรย์ซึ่งหมายความว่าการจัดวางโมเลกุลดีเอ็นเอ แพลตฟอร์มพาหะพิเศษ แผ่นแก้วถูกนำมาใช้เป็นแพลตฟอร์ม

บางครั้งวัสดุอื่นๆ เช่น ซิลิคอน เจลต่างๆ โมเลกุลขนาดใหญ่ทางชีวภาพ สารพันธุกรรม โปรตีน เอนไซม์ที่สามารถจับสารที่คัดเลือกมา ซึ่งรวมอยู่ในสารละลายที่วิเคราะห์ได้จะถูกนำไปใช้กับแท่น ขึ้นอยู่กับว่าใช้โมเลกุลขนาดใหญ่ และเป้าหมายของการศึกษาคืออะไร ไบโอชิปประเภทต่างๆ มีความโดดเด่น สารพันธุกรรม ไมโครอาร์เรย์และไมโครอาร์เรย์โปรตีน ให้เราอธิบายเทคนิคนี้โดยใช้สารพันธุกรรมไมโครอาร์เรย์

อ่านต่อได้ที่ ประจำเดือน วิธีการบางอย่างที่ส่งผลต่อรอบเดือน